細菌分離培養是兔場實驗室診斷工作中一個十分重要的步驟,通過對細菌的分離和純培養,可以根據菌落的形態、大小、結構、色澤、氣味以及有無溶血等情況進行初步鑒定,然后通過進一步的染色鏡檢或者是特殊培養進行鑒定或研究,為病原的確診提供依據。
1.培養基制備培養基是細菌學檢查過程中非常重要的材料,它含有細菌生長所必需的營養物質,細菌經過培養基的純培養,才能夠進行準確的檢查,得到可靠的結果。
(1)肉水的制作:
①材料:瘦牛肉500克,蒸餾水(或常水)1000毫升。
②方法:取瘦牛肉除去脂肪、肌腱,切成碎塊或絞碎,按1千克牛肉2千毫升水的比例,加水浸泡一夜,煮沸一小時,用紗布初步濾去肉渣擠出肉水,再用濾紙濾過,補足原有水量,裝入燒瓶中置高壓滅菌器中120℃20分鐘滅菌,制成肉水。
制作肉水的另一種方法是:取牛肉浸膏0.5-1.0克,加蒸餾水100毫升,加熱溶解,濾紙濾過,并同上述方法進行滅菌即成。
③用途:制作各種培養基的基礎。
(2)營養肉湯:
①材料:肉水1000毫升,蛋白胨I0克,氯化鈉5克。
②方法:將蛋白胨和氯化鈉加入肉水中,稍加熱溶解,用氫氧化鈉溶液調整pH值為7.4-7.6之間,再加溫使溶液均勻。濾過分裝后高壓滅菌備用。
③用途:可供一般的細菌生長需要,檢查細菌的生長表現,也可作為制作固體培養基的基礎。
(3)營養瓊脂:
①材料:營養瓊脂粉40克,蒸餾水1000毫升。
②方法:將營養瓊脂粉加入蒸餾水中,攪拌浸泡1小時,加熱使充分溶解,高壓滅菌備用。
③用途:分離細菌純培養及作為其他特種培養基的基礎。
(4)血液瓊脂培養基:
①材料:脫纖維血5-10毫升,營養瓊脂100毫升。
②方法:準備好滅菌并有玻璃珠的三角燒瓶,無菌采集血液,注入三角燒瓶中,不停地搖動,直至血纖維分離為止,一般需要10分鐘。